Патентообладатель

Федеральный исследовательский центр ИЦиГ СО РАН

Авторы

Розанов А.С., Демидова Е.В., Малуп Т.К., Пельтек С.Е.

Краткая характеристика

Штамм Esherichia coli EX pQE30 получен трансформацией клеток бактерии Е.coli XL1-blue ДНК плазмиды pQE30-endo-xylanase-lx1, разработанной на основе вектора pQE30 и содержащей ориджин репликации pMB1, ген устойчивости к ампициллину bla (кодирующий ?-лактамазу), обеспечивающий отбор клеток с плазмидой, промотор фага Т5 под регулированием оператора лактозного оперона, а также сконструированный ген, кодирующий гибридный белок, содержащий последовательность 6 гистидинов и последовательность эндоксиланазы Geobacillus stearothermophilus 22.

Рис.1. Зависимость активности эндоксилоназы от значений pH и температуры.

Рис.2. Электрофореграмма белков клонов E.coli, несущих экспрессирующий вектор pQE30 со встроенным ферментом эндоксиланазой. 12% ДСН-ПААГ, краситель Coomassie Brilliant Blue G-250. 1 -3,5 – нет экспрессии; 4 – экспрессия эндоксиланазы; 6- маркер молекулярного веса широкого спектра SDS-PAGE Molecular Weight Standards,Broad Range(Bio-Rad, USA). Стрелкой отмечен банд экспрессирующегося фермента.

Области использования

Биотехнология.

Возможный технический и (или) экономический эффект

Штамм обладает более высокой термостабильностью и продуцирует чистую эндоксиланазу без примеси целлюлаз, пригодную для применения в составе комплексных биокатализаторов в процессах гидролиза растительной биомассы.

Сравнительные характеристики с известными разработками

Предлагаемый штамм Esherichia coli EX pQE30 отличается от известных тем, что содержит рекомбинантную плазмиду pQE30-endo-xylanase-lx1 и продуцирует эндоксиланазу, обладающую высокой термостабильностью (выше 55°С), что позволяет использовать ее в составе биокатализаторов для гидролиза растительной биомассы.

Патентная защита разработки

Патент № 2542486, приоритет от 23.09.2013, опубл. 20.02.2015, Бюл.№ 05