Штамм бактерии Esherichia coli EX pQE30, продуцент эндоксиланазы бактерии Geobacillus stearothermophillus 22

Патентообладатель

Федеральный исследовательский центр ИЦиГ СО РАН

Авторы

Розанов А.С., Демидова Е.В., Малуп Т.К., Пельтек С.Е.

Краткая характеристика

Штамм Esherichia coli EX pQE30 получен трансформацией клеток бактерии Е.coli XL1-blue ДНК плазмиды pQE30-endo-xylanase-lx1, разработанной на основе вектора pQE30 и содержащей ориджин репликации pMB1, ген устойчивости к ампициллину bla (кодирующий ?-лактамазу), обеспечивающий отбор клеток с плазмидой, промотор фага Т5 под регулированием оператора лактозного оперона, а также сконструированный ген, кодирующий гибридный белок, содержащий последовательность 6 гистидинов и последовательность эндоксиланазы Geobacillus stearothermophilus 22.

увеличить
Рис.1. Зависимость активности эндоксилоназы от значений pH и температуры.

увеличить
Рис.2. Электрофореграмма белков клонов E.coli, несущих экспрессирующий вектор pQE30 со встроенным ферментом эндоксиланазой. 12% ДСН-ПААГ, краситель Coomassie Brilliant Blue G-250. 1 -3,5 – нет экспрессии; 4 – экспрессия эндоксиланазы; 6- маркер молекулярного веса широкого спектра SDS-PAGE Molecular Weight Standards,Broad Range(Bio-Rad, USA). Стрелкой отмечен банд экспрессирующегося фермента.

Области использования

Биотехнология.

Возможный технический и (или) экономический эффект

Штамм обладает более высокой термостабильностью и продуцирует чистую эндоксиланазу без примеси целлюлаз, пригодную для применения в составе комплексных биокатализаторов в процессах гидролиза растительной биомассы.

Сравнительные характеристики с известными разработками

Предлагаемый штамм Esherichia coli EX pQE30 отличается от известных тем, что содержит рекомбинантную плазмиду pQE30-endo-xylanase-lx1 и продуцирует эндоксиланазу, обладающую высокой термостабильностью (выше 55°С), что позволяет использовать ее в составе биокатализаторов для гидролиза растительной биомассы.

Патентная защита разработки

Патент № 2542486, приоритет от 23.09.2013, опубл. 20.02.2015, Бюл.№ 05